VKY0278_载体库_赢润生物-中国基因研究资源库
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pUC18产品信息

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VKY0278 pUC18 Promega 克隆载体 800 现货

载体描述

pUC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体,通常运用于重组dna的分子克隆中,首先我们制备大肠杆菌的感受态细 胞(能接受外来重组的dna),这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组,通常是rec基因缺陷型的突变体,同时它们必须是限制系统缺陷或限制 与修饰系统均缺陷的菌株,即具有这三种缺陷(rk mk rec ),同时对氨苄青霉素敏感(ap)。puc18载体自身带有抗氨苄青霉素基因,而外源片段不具有,这样只有带有puc18的转化子的菌株才能在氨苄青霉素 平板上存活,而外源片段自身环化的不能存活,这称为抗性筛选。

pUC18 上带有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 个氨基酸的编码序列,在这个编码区中插有一个多克隆位点,且不影响正常功能,DH5α感受态菌株带有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的编码信息,当puc18载体在正常情况下同感受态菌株融合后,互补表达具有酶活性的蛋白质,称为α-互补现象,当有外源片段插入多克隆位点 后,互补现象消失,其形成的菌株颜色具有很大的差异,很容易鉴别,这种筛选方法称为α-互补现象筛选。由上可见,puc18载体除了能重组导入外源片段 外,在筛选表达过程中还具有重要的作用。

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